华西口腔医学杂志

作者：范智博, 金珂, 李胜鸿, 徐洁, 徐晓梅

单位：1.西南医科大学附属口腔医院正畸科，泸州 646099；2.绵阳市中心医院口腔科，绵阳 621099

关键词：Earle’s平衡盐溶液,活性氧,线粒体自噬,人牙周膜细胞,PINK1/Parkin通路

基金：四川省科技厅应用基础项目(2021YJ0151);西南医科大学校级科研项目(2021LZMS019);西南医科大学校级科研项目(2022Z02)

目的 探究人牙周膜细胞（hPDLC）在饥饿条件下活性氧（ROS）与PINK1/Parkin通路介导hPDLC线粒体自噬的具体机制。 方法 分离培养正常牙周组织的hPDLSC，利用Earle’s平衡盐溶液（EBSS）模拟饥饿环境诱导hPDLC线粒体自噬，利用N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）抑制ROS生成以探讨ROS在hPDLC线粒体自噬的作用，利用环孢素A（CsA）抑制PINK1/Parkin通路以研究ROS与PINK1/Parkin通路在饥饿条件下激活hPDLC中的作用。采用流式细胞术及JC-1线粒体膜电位检测试剂盒，检测线粒体膜电位；采用透射电镜观察线粒体自噬体的生成及线粒体形态变化；采用线粒体红色荧光探针定位线粒体，溶酶体绿色荧光探针定位溶酶体；采用DCFH-DA ROS荧光探针检测ROS生成强度；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞中线粒体自噬基因（Tomm20、Timm23）及PINK1/Parkin通路的表达水平，采用蛋白质印迹 （Western blot）检测细胞中线粒体自噬蛋白（Tomm20、Timm23）及PINK1/Parkin通路蛋白表达水平。 结果 EBSS饥饿作用30 min后，诱导激活hPDLC线粒体自噬的作用最强，ROS表达增加，且线粒体自噬相关基因（Tomm20、Timm23）下调（P<0.001），PINK1/Parkin通路表达上调（P<0.001）。NAC抑制ROS的产生后，自噬被抑制，同时Tomm20、Timm23表达上调（P<0.001，P<0.05），PINK1/Parkin通路表达下调（P<0.001，P<0.05）。而当CsA抑制PINK1/Parkin通路表达时（P<0.05，P<0.05），自噬被逆转，同时Tomm20、Timm23表达上调（P<0.001，P<0.01）。 结论 ROS在饥饿条件下主要通过PINK1/Parkin通路增强hPDLC线粒体自噬。

来源：2022年第6期

《华西口腔医学》期刊编辑部

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