华西口腔医学杂志

作者：辛川,王冏珂,李敬,曾昕

单位：口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院黏膜病科,成都 610041

关键词：口腔鳞状细胞癌,PA28γ,慢病毒,过表达载体,过表达稳转株

基金：国家重点研发计划重点专科课题(2017YFC0840100);国家重点研发计划重点专科课题(2017YFC0840107);国家自然科学基金(81472533);国家自然科学基金(81672675);国家自然科学基金(281771081)

目的 构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞稳转株,并验证其过表达PA28γ的效率。方法 首先采用聚合酶链反应（PCR）克隆PA28γ基因至pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中,采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定;其次采用293T细胞包装病毒;然后采用病毒感染OSCC细胞构建PA28γ稳定过表达细胞株。最后利用免疫印迹技术检测OSCC细胞稳转株中PA28γ表达的水平。结果 DNA测序结果显示成功构建PA28γ过表达慢病毒载体构建;荧光结果显示,PA28γ过表达慢病毒成功感染OSCC细胞,并呈现樱桃红色荧光;免疫印迹结果显示,构建的PA28γ稳定过表达细胞显著提高细胞中PA28γ表达水平。结论 PA28γ过表达慢病毒载体能显著提高细胞中PA28γ蛋白表达水平,为进一步研究PA28γ对OSCC发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。

来源：2020年第1期

《华西口腔医学》期刊编辑部

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