华西口腔医学杂志

作者：刘飞,王志峰,刘芳芳,徐巾诏,刘奇博,蓝菁

单位：1.山东大学口腔医学院修复教研所,山东省口腔组织再生重点实验室；2.山东大学口腔医院儿童牙病科,山东省口腔组织再生重点实验室,济南 250012；3.南阳市口腔医院种植科,南阳 473000

关键词：微小RNA-29a-3p,高脂血症,卷曲蛋白4,双荧光素酶报告基因,骨整合

基金：国家自然科学基金(81671025);山东省科技发展计划(2015GSF118186)

目的 研究microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对高脂环境下大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化和高脂血症大鼠种植体骨整合的影响及其作用位点。方法 1）体外实验：对BMSCs分别进行普通和高脂成骨诱导,通过逆转录实时定量聚合酶链反应和Western blot检测miR-29a-3p及成骨相关因子碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关基因2（Runx2）的基因和蛋白质表达;高脂培养的BMSCs分别转染miR-29a-3p模拟物、抑制物及阴性对照（NC）质粒,RT-qPCR检测miR-29a-3p、ALP及Runx2基因表达情况,Western blot检测ALP、Runx2蛋白表达情况。通过靶基因预测软件（Target Scan、MiRNA.org等）预测miR-29a-3p与成骨相关的靶基因为卷曲蛋白4（Fzd4）,双荧光素酶报告检测miR-29a-3p与Fzd4的相互作用关系。2）体内实验：高脂血症大鼠为实验组,普通大鼠为对照组,两组分别植入种植体,检测种植体周围骨组织中miR-29a-3p、ALP、Runx2的表达差异;行种植体-骨组织的硬组织切片,亚甲基蓝-酸性品红染色,进行组织学观察。分别将miR-29a-3p过表达慢病毒载体及空白对照慢病毒载体注射入高脂血症大鼠,种植体植入后3、10 d检测种植体周围骨组织中ALP、Runx2的表达变化以研究miR-29a-3p对高脂血症大鼠成骨的作用。结果 高脂组与普通组相比,ALP、Runx2和miR-29a-3p表达下调,BMSCs成骨分化能力下降。miR-29a-3p模拟物组与抑制物组相比,ALP、Runx2表达升高,BMSCs成骨分化能力增强。体内实验也得到了相似结果。双荧光素酶报告基因分析证实miR29a-3p通过直接结合3’-UTR抑制Fzd4表达。结论 miR-29a-3p对高脂环境下大鼠BMSCs成骨分化起正向调节作用,可直接与Fzd4结合调节成骨分化;miR-29a-3p能够促进高脂血症大鼠种植体周围成骨标志基因的表达,有利于骨整合。

来源：2019年第2期

《华西口腔医学》期刊编辑部

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